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Experimento
I
Metodología
Sujetos
Se utilizaron 58 ratas
infantes de la cepa Wistar representativas de 7 camadas. Las mismas provinieron
del bioterio del Instituto de Investigación Médica Mercedes y Martín
Ferreyra. Dichos animales dispusieron libremente de comida y agua durante su
desarrollo, permaneciendo junto a sus padres biológicos en cajas de maternidad
standard. El bioterio tuvo una temperatura que osciló entre los 21 y los 25
grados. El fotoperíodo fue de 12
horas diarias de luz fluorescente, con las luces encendiéndose
a las 8:00 horas AM. Los sujetos
eran infantes de 14 días (DP 14) al momento de iniciar el experimento.
El día del nacimiento se consideró como día posnatal 0 (DP 0). Los animales
fueron utilizados siguiendo los lineamientos éticos para el manejo de animales
sugeridos por la Asociación Psicológica Americana (Iversen & Lattal,
1991). Diseño experimental
Los
sujetos fueron aleatoriamente distribuidos en 6 grupos definidos por dos
factores independientes y sus respectivas categorías.
El primer factor implicó el elemento farmacológico (etanol o solución
salina) a ser administrado previo a que los infantes percibieran la secuencia
sensorial tacto-gusto (lija-sacarina). El
segundo factor implicó el proceso de evaluación de los organismos. Se evaluó
el consumo de sacarina antes de evaluarse la preferencia por el tacto (grupo
Ingesta-Tacto: IT), después de la evaluación táctil (grupo Tacto-Ingesta: TI)
o cuando la sacarina fue consumida en presencia del tacto (grupo Simultaneo: S).
En el caso de la evaluación de preferencia táctil, los organismos son
representativos de dos grupos. Aquellos donde se evaluó primero la preferencia
táctil y luego la ingesta de
sacarina o viceversa. Como se verá a continuación, la evaluación táctil no
cuenta con un grupo simultaneo, en el cual
se registre la preferencia táctil en presencia del consumo de sacarina. Procedimiento
La dosis etílica
utilizada fue de 2,5 gramos de alcohol (96°)
por kilogramo de peso corporal, infundida por vía intragástrica (ig).
Esta se obtuvo administrando una solución de alcohol (etanol marca
Porta) al 18,53% volumen/volumen, utilizándose agua como vehículo. El volumen
de solución administrado a cada
rata fue de 0.017 ml por gramo de
peso corporal. El mismo volumen fue aplicado en el caso de la administración de
solución salina (0.89%
peso/volumen). El DP 14 los sujetos
fueron retirados de sus cajas de maternidad cuatro horas antes de ser realizados
los procesos de administración y condicionamiento. Inmediatamente retirados de
sus cajas se les procedió a implantar una cánula de polietileno de 7 cm de
largo (aprox.) y 0,11 mm de diámetro interno (Clay-Adams PE 10), a nivel
intrabucal. Uno de los extremos de la cánula tenía la forma de un borde
circular, perpendicular al resto del dispositivo. Este borde fue moldeado
mediante la aplicación de calor. Para implantar la cánula se utilizó un
alfiler entomológico, de modo tal que el borde circular de la misma quedase
asentado contra la mucosa interna de la mejilla y
el resto de la cánula permaneciese fuera de la boca.
Este procedimiento ha sido extensamente utilizado en estudios de procesos
de ingesta y estimulación olfatogustativa (hall, 1977; Pepino et al, 1998).
Terminado el mismo, los organismos permanecieron aislados de sus padres y
deprivados de agua y/o comida. Para ello se procedió a alojarlos en
cajas de mantenimiento con viruta, calefaccionadas mediante almohadillas térmicas,
ya que estos animales, debido al momento ontogenético en que se encuentran, aun
no pueden autorregular completamente su temperatura corporal. Luego de cuatro horas
de realizado el implante de la cánula los sujetos fueron retirados de las cajas
de mantenimiento y pesados (Balanza Ohaus dial-o-gram), con una precisión
equivalente a +/-0.1 gramos. Este pesaje fue realizado con el objeto de
determinar el volumen de solución (etanol o solución salina) a administrar.
Previo al pesaje se realizó estimulación
anogenital de la cría mediante un algodón, con el fin de inducir micción y
defecación. La administración intragástrica se realizó utilizando una
jeringa de 1cc, con aguja de 27 g*1/2. A la misma se le adosó una cánula, la
cual fue introducida oralmente 5 cm hasta el estómago del animal. Luego de
realizada la administración correspondiente, ya sea etanol o solución salina
(minuto 0 post-administración), los animales retornaron a su caja de
mantenimiento, siendo separados en función de su tratamiento específico. Esto
se realizó para evitar que las crías que recibieron el tratamiento con etanol
interaccionen con las que recibieron salina, ya que se ha demostrado que
animales no intoxicados desarrollan aversiones hacia estímulos olfatogustativos
al interaccionar con congéneres en estado de intoxicación (Coombes et al. ,
1980). Los animales permanecieron sin ningún tipo de manipulación,
en su caja de mantenimiento, durante 5 minutos, luego de los cuales
fueron retirados. Durante los próximos 10 minutos (5’ -15’
post-administración) se realizó el proceso asociativo entre las claves
discretas táctiles y los efectos de la solución administrada. Para ello los
animales fueron alojados en un cubículo
de plexiglas rectangular de 28x12x15 cm. aprox. El piso de dicho rectángulo
estuvo constituido por papel lija al agua de 50 gramos (Doble A). Este cubículo,
a su vez, estaba rodeado por paneles de telgopor forrados con papel afiche
negro, con el objeto de evitar la percepción de claves visuales no relevantes
presentes en el ambiente experimental. Cumplidos los 10 minutos, los organismos
fueron retornados a su caja de mantenimiento, en la cual permanecieron otros 10
minutos (15’-25’ post-administración). A los 25 minutos de realizada la
administración, los sujetos fueron nuevamente retirados, pesados y estimulados
anogenitalmente. Luego la cánula
intrabucal de los sujetos fue conectada a una bomba de infusión (ManoStat
Cassete R Pump). Dicha bomba administró a los sujetos una solución de sacarina
(0,5 gramos /100 ml de agua) durante 10 minutos (25’-35’ post-admistración)
de manera ininterrumpida. El volumen administrado a cada animal fue igual al
1,83% de su peso corporal, por lo que la tasa de flujo de la bomba se ajustó en
función del peso preinfusión de cada animal. Mientras duró la infusión, los
sujetos permanecieron dentro de cajas individuales de plexiglas de 15x7x14 cm. ,
con piso de algodón. Por medio de este procedimiento se asocia una clave
olfatogustativa (sacarina) con los efectos de la administración durante el período
que media entre los 25 a 35 minutos de realizada la misma. Terminada la infusión
de sacarina los sujetos fueron nuevamente pesados con el objeto de obtener
medidas de consumo. Se midió el consumo absoluto de sacarina (Peso post-infusión
- Peso Pre-infusión) y el aumento
porcentual de peso por parte del organismo [(Peso post-infusión - Peso
Pre-infusión / Peso Pre-infusión) x
100]. Luego, fueron devueltos con sus padres biológicos habiéndoseles retirado
la cánula intrabucal.
A continuación, la tabla I presenta
una resumida descripción de la distribución de los sujetos durante el día
experimental I o día de condicionamiento.
El DP 15, los sujetos
fueron nuevamente expuestos al implante de la cánula oral mediante el mismo
procedimiento del día anterior. Luego de realizado el implante permanecieron en
las cajas de mantenimiento por el término de ocho horas. Pasado este tiempo, y
sin mediar ningún tipo de administración de soluciones, se procedió a evaluar
los efectos de los procesos de condicionamiento realizados el día anterior. En
este momento, los sujetos fueron nuevamente distribuidos de manera aleatoria en
tres nuevos grupos. El primero de estos grupos (“tacto-ingesta”: TI) fue
evaluado en primera instancia en la prueba de preferencia táctil y luego en la
prueba de ingesta. Para ello se introdujo al animal en la caja de plexiglas de
28x12x15 cm. La única diferencia con la utilizada el día anterior es que el
piso de la misma no fue homogéneo, sino que se dividió en dos sectores
iguales. El primero de ellos constituido por el papel de lija anteriormente
descrito, en tanto que el otro fue la cara opuesta de dicho papel (“contralija”). Esta última superficie es claramente
diferente a la lija, debido a su color (marrón claro contra el negro de la
lija) y textura. El animal permaneció cinco minutos dentro de esta caja, con
total libertad para desplazarse en la misma. Durante estos cinco minutos se
registró la conducta del animal mediante filmación (8 mm Video Camera recorder
- Samsung) para su posterior evaluación. Asimismo, utilizando una interface que
transforma la información analógica
en digital, se procesó la imagen
filmada utilizando un sistema de procesamiento de imagen digital especialmente
diseñado para el análisis de movimientos y conductas de organismos
(Ethovision, Video Tracking, Motion analysis and Behavior recognition system,
Noldus Information technology, Holanda). La principal medida utilizada como índice
de preferencia por las claves táctiles fue el tiempo de permanencia del animal
sobre cada una de las superficies. Asimismo se calcularon porcentajes de
permanencia, número de visitas a cada superficie,
duración promedio de cada visita y distancias recorridas en cada zona. Luego de pasados cinco
minutos los animales fueron retirados de la caja y pasaron a ser evaluados en la
prueba de ingesta, a fin de determinar posibles respuestas condicionadas hacia
la sacarina. Para ello primeramente se los pesó, previa estimulación
anogenital. Esto se realizó con el objeto de ajustar la tasa de flujo de la
bomba al peso del animal, para que
el volumen de sacarina infundido durante 10 minutos de manera ininterrumpida se
mantenga en un 1,83% del peso corporal. Luego del pesaje, las cánulas
intrabucales se conectaron a la bomba de infusión, procediéndose a la
administración de sacarina. Pasados 10 minutos los animales fueron nuevamente
pesados para determinar su aumento porcentual de peso, tal como se explicitó
anteriormente. Luego de ello, se les retiró la cánula y retornaron con sus
padres biológicos. El segundo grupo
(“ingesta-tacto”: IT) fue evaluado primeramente en la prueba de ingesta y
luego en la prueba de preferencia táctil. Los procedimientos utilizados fueron
exactamente iguales a los ya descritos para el anterior grupo con la sola
diferencia de la inversión de la secuencia de las evaluaciones. El tercer grupo
(“simultaneo”: S) recibió únicamente la prueba de ingesta,
pero con algunas modificaciones. Mientras los dos primeros grupos pasaron
los 10 minutos que dura dicha prueba dentro de cubículos individuales con piso
de algodón, el grupo simultáneo lo hizo dentro del rectángulo de 28x12x15 cm.
con piso enteramente de papel de lija; el cual había sido utilizado el día
anterior durante el proceso de condicionamiento. Este grupo no fue evaluado en
la prueba de preferencia táctil, pero su conducta dentro del citado rectángulo
fue filmada. Una
descripción esquemática de la distribución de los sujetos durante la evaluación
del condicionamiento se presenta en la tabla II.
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